Research on Biomedical Engineering
https://rbejournal.org/article/5889fb725d01231a018b462a
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Original Article

Marcação do peptídeo intestinal vasoativo (VIP) com radioiodo utilizando diferentes agentes oxidantes em substituição eletrofílica

Radioiodination of vasoactive intestinal peptide (VIP) using different oxidative electrophilic substitution agents

Colturato, Maria Tereza; Silva, Constancia Pagano Gonçalves da; Araújo, Elaine Bortoleti de

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Resumo

O Peptídeo Intestinal Vasoativo (VIP) é um peptídeo linear composto de 28 aminoácidos com um amplo espectro de ativida des biológicas. Várias células tumorais expressam quantidades significantes de receptores para VIP, provendo a base para o uso do peptídeo na localização de adenocarcinomas. A molécula de VIP contém dois resíduos de tirosina, nas posições 10 e 22, sus ceptíveis à iodação. Este trabalho descreve a influência do agente oxidante na pureza radioquímica e nas diferentes formas de VIP obtidas, analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Três procedimentos de marcação foram estudados. Nos dois primeiros foi utilizado como agente oxidante Iodogen, na forma de um fino filme, aderido ao tubo de reação bem como na forma de suspensão. As reações de iodação foram conduzidas por 30 minutos, à temperatura ambiente e com agitação suave. No terceiro procedimento de marcação empregou-se Cloramina T como agente oxidante e após um curto período de incubação à tempera tura ambiente e agitação suave, a reação foi interrompida pela adição de metabissulfito de sódio. A pureza radioquímica das marcações foi determinada por cromatografia líquida de alta efi ciência (coluna de fase reversa C18, 5 µm, 4,6 x 50 mm) com mistura de solvente composta de TFA (solução aquosa de ácido trifluoracético 0,1%) : acetonitrila 73:27 %, com fluxo de 0,5 mL/minuto. A porcentagem de radioiodo nas marcações também foi determinada por eletroforese. O peptídeo radioiodado foi pro duzido com alto rendimento e pureza radioquímica, em um curto período de tempo, particularmente ao utilizar-se Cloramina-T como agente oxidante. O sistema de cromatografia líquida estu dado possibilitou a separação do VIP marcado com alta atividade específica, necessária para procedimentos diagnósticos que envol vem a ligação de radiofármacos a receptores específicos.O Peptídeo Intestinal Vasoativo (VIP) é um peptídeo linear composto de 28 aminoácidos com um amplo espectro de ativida des biológicas. Várias células tumorais expressam quantidades significantes de receptores para VIP, provendo a base para o uso do peptídeo na localização de adenocarcinomas. A molécula de VIP contém dois resíduos de tirosina, nas posições 10 e 22, sus ceptíveis à iodação. Este trabalho descreve a influência do agente oxidante na pureza radioquímica e nas diferentes formas de VIP obtidas, analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Três procedimentos de marcação foram estudados. Nos dois primeiros foi utilizado como agente oxidante Iodogen, na forma de um fino filme, aderido ao tubo de reação bem como na forma de suspensão. As reações de iodação foram conduzidas por 30 minutos, à temperatura ambiente e com agitação suave. No terceiro procedimento de marcação empregou-se Cloramina T como agente oxidante e após um curto período de incubação à tempera tura ambiente e agitação suave, a reação foi interrompida pela adição de metabissulfito de sódio. A pureza radioquímica das marcações foi determinada por cromatografia líquida de alta efi ciência (coluna de fase reversa C18, 5 µm, 4,6 x 50 mm) com mistura de solvente composta de TFA (solução aquosa de ácido trifluoracético 0,1%) : acetonitrila 73:27 %, com fluxo de 0,5 mL/minuto. A porcentagem de radioiodo nas marcações também foi determinada por eletroforese. O peptídeo radioiodado foi pro duzido com alto rendimento e pureza radioquímica, em um curto período de tempo, particularmente ao utilizar-se Cloramina-T como agente oxidante. O sistema de cromatografia líquida estu dado possibilitou a separação do VIP marcado com alta atividade específica, necessária para procedimentos diagnósticos que envol vem a ligação de radiofármacos a receptores específicos.

Palavras-chave

Peptídeo vasointestinal ativo, Radiofármácos, Radioiodação de proteínas.

Abstract

Vasoactive Intestinal Peptide (VIP) is a linear 28 residue polypeptide with a wide range of biological activities. Vari ous tumor cells express significant amounts of VIP recep tors and this became the basis for use of radiolabelled VIP for the in vivo localization of adenocarcinomas. The VIP molecule contains two tyrosine residues, in positions 10 and 22, susceptible to iodination. This work describes the influence of the oxidation agent in the radiochemical purity and in the production of different labelled forms of VIP, analysed by high performance liquid chromatography (HPLC). Three labelling procedures using oxidant agent were employed. In the first one, Iodogen was prepared in the form of pre-coated reaction vial. In the second proce dure, Iodogen was introduced as a suspension and the iodinations were allowed to proceed for 30 minutes at room temperature with gentle stirring. The third labelling proce dure used Chloramine T as oxidant agent after a few min utes of reaction (less than 3 minutes) at room temperature and with gentle stirring, the reaction was terminated by the addition of sodium methabisulfite solution. The radio chemical purity was determined by HPLC (RP C18, 5 µm, 4.6 x 50 mm) eluted isocratically with 73:27 % TFA (trifluoroacetic acid 0.1% aqueous solution: acetonitrile) with a flow rate of 0.5 mL/minute. Free radioiodine was also determined by horizontal zone electrophoresis. Radioiodinated VIP was obtained with high labelling yield and radiochemical purity, in a short reaction time, when using Chloramine T as oxidant agent. The proposed isocratic HPLC system allows the separation of labelled VIP of high specific activity, necessary for receptor-medi ated diagnostic procedures with radiopharmaceuticals.

Keywords

Protein radioiodination, Radiopharmaceuticals, VIP
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